PCR van het Monkeypoxvirus Snelle van het het Serumletsel van Testkit real time for human de Afscheidingssteekproeven

Specificatie

PROCEDURES

1. Steekproefvoorbereidingen
DNA-de extractie van klinische steekproeven wordt geleid volgens de overeenkomstige vereisten en de procedures in de de extractieuitrusting van virusdna. Gehaald

DNA kan direct voor opsporing worden gebruikt. Als de steekproef niet onmiddellijk na extractie wordt ontdekt, zou het bij -70°C voor reserve moeten worden opgeslagen, die herhaalde freeze-thaw cycli vermijden.

2. De voorbereiding van het reactiesysteem
(1) systeemvoorbereiding: Neem de reagens van de uitrusting, en sta het toe om volledig bij kamertemperatuur te ontdooien. Keer het mengsel om en centrifugeer onmiddellijk. N de testreacties (N = aantal te testen steekproeven + positieve controle + negatieve controle + 1) worden voorbereid op reactiesystemen, respectievelijk, als volgt.

(2) de distributie van het reactiesysteem: Meng goed de bovengenoemde reactiebuffer, centrifugeer, en deel 15μL van gedeelten in PCR buizen geschikt voor fluorescent PCR instrument uit. (Centrifugeer de PCR buizen bij 6,000rpm voor jaren '30 en vervoer aan de streek van de steekproefbehandeling.)

3. Steekproeflading (de streek van de Steekproefbehandeling)
Voeg nucleic zuursteekproef van 10μL, negatieve controle en positieve controle aan de bovengenoemde PCR respectievelijk buizen toe. GLB de buizen strak en centrifugeert bij 6,000rpm voor 10s en dan vervoer aan PCR versterkingsstreek.
* Voorzorgsmaatregel: Het toevoegen van steekproeven in de volgende orde is
geadviseerd: verbied control-> nucleic zuursteekproef - > positieve controle.
 

4. PCR versterking (PCR versterkingsstreek)
4.1 zet caped PCR buizen in PCR machine in real time voor versterking.
4.2 fluorescentiepcr cyclusvoorwaarde het plaatsen

Verzamel fluorescente signalen bij stap3:60 ℃; 35s voor ABI 7500, jaren '20 voor slan-96S/96P, terwijl 13s voor andere PCR Systemen In real time. Het totale volume: 25μL.

4.3 verwijdering na opsporing
Schik de PCR buizen in een verzegelde zak na reactie en behandel de gebruikte buizen als medisch afval.
 

5. Montages voor resultaatanalyse
Plaats de basislijn bij een gebied vóór de exponentiële versterking waar de fluorescente signalen van alle steekproeven vrij stabiel zijn (geen significante schommelingen in alle steekproeven); plaats het uitgangspunt (cyclusaantal) vanaf de signaalschommelingen bij de aanvang
fase van fluorescentieinzameling; plaats het eindpunt (cyclusaantal) 1~3 cycli vóór Ct van de eerste steekproef om exponentiële versterking in te gaan. 4~15 cycli worden geadviseerd.
Plaats het drempelrecht boven het hoogste punt van de negatieve kromme van de controleversterking (onregelmatige lawaaikromme).
 

6. Kwaliteitscontrolecriteria
Voorafgaand aan de evaluatie van de specimenresultaten, zouden de Positieve Controle en de Negatieve Controle moeten worden geïnterpreteerd gebruikend de interpretatielijst hieronder, en de Positieve Controle en de Negatieve Controlekromme moeten correct worden uitgevoerd, anders is het steekproefresultaat ongeldig.

7. Interpretatie van Testresultaten
FAM-de kanalen voor Monkeypox-Virus, zouden opsporingsresultaat moeten worden geïnterpreteerd zoals hieronder.
a) Positief: Ct ≤ 38 en de versterkingskromme zijn S-vormig.
B) Verdacht: 38 < Ct=""> 40 of ongeldige Ct en Ct ≤ 35 in VIC kanaal voor de tweede test.
c) verbied: Ct > 40 of ongeldige Ct en Ct ≤ 35 in VIC kanaal.
D) test opnieuw: Ct > 40 of ongeldige Ct en Ct > 35 in VIC kanaal.